顯微鏡固定的具體方法可參考常電鏡樣品制備方法，徠卡顯微鏡免疫電鏡和電鏡細(xì)胞化學(xué)各章。顯微鏡所謂包裹(Encapsulation)，顯微鏡就是利用某些大分子溶液浸透樣品的過(guò)程.這些大分子不會(huì)穿過(guò)細(xì)胞膜而進(jìn)入細(xì)胞，只能占據(jù)細(xì)胞間的空隙，顯微鏡包裹的目的也是為了防止超薄切片在制備過(guò)程中被破壞。這一步對(duì)于顯微鏡分散的細(xì)胞樣品尤其必要。

如果徠卡顯微鏡樣品是游離細(xì)胞，可按下述步驟包裹:

　　1.將BSA加入一離心管內(nèi)，顯微鏡濃度與上同;

　　2.把經(jīng)過(guò)固定的細(xì)胞轉(zhuǎn)入離心管;

　　3.在冷凍離心機(jī)上離心10分鐘，800g, 40C;

　　4.去掉上清，數(shù)碼顯微鏡在管底沉淀上加一滴用0. lmol/L磷酸緩沖液配制的10%的戊二醛，使殘余的BSA交連;

　　5.用針把聚合后的團(tuán)塊撥起，切成小塊。

　　為防止顯微鏡冷凍時(shí)生成大的冰晶而使結(jié)構(gòu)破壞，組織需經(jīng)冷凍保護(hù)劑處理，常用的冷凍保護(hù)劑有甘油(30%), DMSO (20%)和蔗糖(2.3mol/L)，均用緩沖液配制，顯微鏡組織在冷凍保護(hù)劑中浸泡的時(shí)間為0.5-1小時(shí)(室溫)或過(guò)液((400）

　　為防止大的冰晶產(chǎn)生，數(shù)碼顯微鏡除使用冷凍保護(hù)劑外，應(yīng)采取速凍的辦法，其基本要求與具體作法和冷凍斷裂與蝕刻時(shí)相同，即將經(jīng)數(shù)碼顯微鏡冷凍保護(hù)的組織塊投入用液氮冷卻的氛里昂12內(nèi).

       如果你的支架比較穩(wěn)定，不會(huì)與各步驟中的試劑反應(yīng)，然后你對(duì)于細(xì)胞的脫水變形也能接受，那就用常規(guī)的方法。

       如果你的支架不穩(wěn)定，細(xì)胞干燥形變后，脫水過(guò)程會(huì)溶解或者反應(yīng)。而且細(xì)胞變形也不太好看，建議你可以用冷凍掃描電鏡。冷凍掃描電鏡是解決這樣的“困難樣品”的*方法。樣品直接冷凍到液氮泥里面，不經(jīng)過(guò)其他脫水過(guò)程。*保持樣品原始狀態(tài)！